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光谱校正指导

以Applied Biosystems 3500/3500XL遗传分析仪为例：

（一）光谱校正试剂的准备
1、根据仪器的灵敏度确定光谱校正试剂的加入量，一般为2~4 μl，加入
196~198 μl去离子甲酰胺使体系达到200 μl，混匀；
2、对于3500XL遗传分析仪，分装到96孔PCR板的A1-H3孔中，对于3500遗传分析仪，分装到A1-H1孔中，均不能分装到其他孔。每孔分装10 μl；盖上隔片，短暂离心。
3、 95℃变性3 min，立即放在冰上冷却3 min；
4、将PCR板置于3500 96孔标准底座上，盖上板盖。放在自动上样器A板的位置。

（二）仪器参数设置和运行
根据3500/3500xL型遗传分析仪的用户手册，进行仪器保养维护、安装毛细管矩阵、更换缓冲液及胶，并进行空间校正。详细可参考 3500/3500xL型遗传分析仪的用户手册。
1、打开3500 Data Collection software，右侧Pre-Heat the Oven下温度设置为60℃，在第一次电泳之前，点击Start Pre-Heat icon至少预热仪器 30mins。(下图)

2、点菜单栏 Library，左侧导航栏点 Dye Sets，点 Create。
3、在出现的 Create New Dye Set 界面中，Dye Set Name 命名为 MR E5； Chemistry 选择 Matrix Standard；Dye Set Template 选择 E5 Template。点右下角 Save 保存设置。
4、点菜单栏 Maintenance，左侧导航栏点 Spectral；出现的 Calibration Run 界面中，Chemistry Standard 选择 Matrix Standard，Dye Set 选择 MR E5；其他设置不变。
5、点右侧 Start Run 开始运行。
6、如果第一次校正通过的毛细管数少于规定值，仪器会自动重复运行光谱校正两次。在光谱校正完成后，仔细检查每根毛细管的峰图，确保无误后点 Accept。

对于详细的光谱校正质量判断标准参照 3500 Series Data Collection Software Version 1.0 HID User Manual

光谱校正不通过