你 工作精神压力过大吗？

经常熬夜？内分泌失调？营养不良？

你，有脱发困扰吗？

       随着工作及生活压力的增加和饮食习惯的改变，“脱发”年龄提早不仅大势所趋，甚至还有愈演愈烈的趋势。这个“社会现象”连在刑侦和司法鉴定体系都有体现，更多的毛发检材被送往实验室。

       甚至….

       毛发作为一种易发现、易取得、易储存并且易运输的常见检材，无论在司法鉴定或是刑侦体系中都常与它打交道。当面对毛发检材，如何从毛发中提取出足量的DNA是日常工作中普遍遇到的问题。更何况，现场取得的毛发检材，大多数来自自然脱落或断发。这类毛发检材相比于新鲜拔取的毛发，处理难度级别可以说高了不只一个人参（编注：人参很难）。

       在讨论这个问题之前，我们首先了解下毛发的结构：毛发整体分为毛囊和毛干2部分，毛囊包括皮脂腺、毛球等；毛干则由毛小皮、毛皮质和毛髓质组成。脱发是由于毛囊处于休止期或坏死，因此，脱落的毛发上所带的毛囊组织很少。而如果是断发则仅有毛干组织。

上为毛发结构图，下为毛发生长周期，自然脱发是处于休止期

  如何对毛发进行DNA提取  

       对检材进行DNA提取时，首先考虑的是检材上是否有DNA或者哪个部分有DNA。因此，首先我们需要清楚DNA所在的位置。

       正常毛发（正常脱落毛发、无烫染）中的DNA主要存在于毛囊位置，由于毛囊部分具有丰富的腺体细胞及皮肤细胞，故具有毛囊的毛发DNA提取成功率较高。而毛干与此相反，毛干的毛小皮及毛皮质的主要组成分为角蛋白纤维，髓质层与皮质层中含有大量色素，因此具有携带核DNA的细胞少之又少。同时通过查询相关文献，毛干中可提取DNA的区域至今尚不明确。部分研究学者认为髓质中存在少量核DNA，也有国外研究学者认为毛干提出的核DNA主要存在于外部角质层。

       从另一个角度，毛干中的线粒体DNA相对于核DNA来说，含量很大。线粒体DNA常被用于母系亲缘关系鉴定（线粒体研究对医学的贡献远超你的想象），在无毛囊或毛囊已败坏而毛发样本又很难得的情况下，这种鉴定也具有较高的价值。

       目前法医DNA实验室是如何对毛发进行有效的DNA提取呢？常见使用的方法分为5种：

1 有机溶剂提取法；

2 Chelex 100处理法；

3 商品试剂盒处理；

4 PCR缓冲液加蛋白酶K速提；

5 组合方法：如“经典有机溶剂法”结合“纳米磁珠法”等。

       阅微基因的微略DNA提取试剂盒提取毛发DNA方法采用的就是第五种方法——裂解缓冲液、蛋白酶K、DTT搭配超顺磁珠，可有效提取纯化DNA，减少PCR抑制剂存留。

使用微略DNA提取试剂盒提取毛发DNA

——超顺畅柔滑的使用体验

  试剂盒使用方法  

1  取适量带毛囊毛发(自然脱落毛发亦可)，取毛囊部位放入2.0mL离心套管，加入消化缓冲液100μL，蛋白酶K 10μL，DTT 4μL，56℃消化15min，加入裂解结合液300~ 400μL，99℃加热15min，12,000g离心2min，弃套管与载体，收集离心管中液体。注意：如果发现离心管底有沉淀(沉渣)，用移液器将上清小心转到另一离管。毛发相对其他检材DNA含量较少，如果需获得尽可能多DNA，可以补加蛋白酶K，延长消化时间至组织完全。

2  将磁珠混匀后，于收集液中加入磁珠20μL，涡旋混匀，放入翻转摇匀仪吸附15min。

3  将离心管放置到磁性架上吸附1min，吸弃上清。

4  加入漂洗液500μL，涡旋混匀，将离心管放置到磁力架上吸附1min，吸弃上清 。

5  重复步骤4一次。注意：最后漂洗环节尽可能将液彻底吸弃，防止乙醇难以完全挥干影响PCR扩增。

6  60°C干燥磁珠 2~5min至管中液体完全消失。

7  加入20~300μL洗脱液，涡旋混匀，56°C孵育15min。磁性架分离，上清即为DNA，-20°C保存 。说明：洗脱液的用量应根据检材条件和PCR需要适当选用。

参考文献：

管政、陈爱亮.毛干DNA提取方法概述[J].中国生物工程杂志.2012.32(10)：128-134.